四聚体技术（四聚体技术）
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更新时间：2023-05-19
四聚体技术简介
由于可溶性MHC单体分子与TCR的亲和力很低，解离快，而多价分子可与一个特异性T细胞上的多个TCR结合，使其解离速度大大减慢。为此Altman等提出借助生物素—亲和素级联反应放大原理构建MHC I类分子四聚体。该方法通过基因工程技术把长度为15个氨基酸残基的生物素酶底物肽(Bio A substrate peptide，BSP)加在MHCI类分子如HLA-A2重链的羧基端形成融合蛋白，在体外按一定比例与beta微球蛋白及特异的抗原短肽共孵育，使其折叠成正确的构象，成为pMHC复合物。将生物素标记在底物肽的赖氨酸残基上，使得一个标记荧光素的链亲和素与四个生物素标记的pMHC复合物结合形成四聚体，MHC-抗原肽四聚体与抗原特异性CFI-上的TCR结合后，即可以通过流式细胞仪定量检出体内抗原特异性CTL，并能将其分选出以供体外培养扩增和功能分析之用。
作用
四聚体技术使抗原特异性CTI-活性检测达到特异、高效和直接定量的程度，可应用于免疫学研究和检测、特异性免疫治疗以及疫苗疗效监测等多个方面。
(1)作为临床诊断工具，定量检测外周血及组织中抗原特异性CTI，的比率，并进行表型及功能分析。Altman等曾在大量无症状AIDS患者体内检测到抗原特异性CTI。，检出率高达2%。Zerbini等应用四聚体技术及免疫组化方法首次在肝细胞肝癌患者肿瘤组织中检测到肽特异性的CD8 CTL，为针对MAGE抗原的免疫治疗在HCC中的应用提供了广阔的前景。在自身免疫性疾病中四聚体原位染色最早用于TCR转基因小鼠。通过对抗原特异性CTL的定量检测、表型及功能分析，为阐明病毒感染性疾病、肿瘤及自身免疫性疾病的发病机制奠定了基础。
(2)用于过继性肿瘤免疫治疗：Mei-denbauer等将大量Melan-A肽特异性CTL(42．1%)，静脉输注给8例难治性恶性黑色素瘤患者，结果发现外周血单核细胞中抗原特异性CTL的比率由输注的o．01%～0．07%升至输注后的2%。而且这些细胞能在活体内存活数周，具有分泌INF-7功能，并优先聚集到肿瘤局部发挥作用。
(3)用于疫苗疗效的监测：近年用抗原肽脉冲处理的扰作为疫苗免疫机体从而诱发有效的CTL反应成为研究热点。可用同源肽构建的四聚体监测该疫苗的疗效。
