双缩脲反应(肽和蛋白质特有的颜色反应)
双缩脲反应是肽和蛋白质所特有的,而为氨基酸所没有的一种颜色反应。一般分子中含有两个氨基甲酪基(即肽键:-CO-NH-)的化合物与碱性溶液作用,生成紫色或者蓝紫色的络合物。 中文名 | 双缩脲反应 |
外文名 | biuret test |
类别 | 一种颜色反应 |
产物 | 紫色或蓝紫色络合物 |
说明 | |
在碱性溶液(NaOH)中,双缩脲(H2NOC-NH-CONH2)能与铜离子(Cu2+)作用,形成紫红色络合物(该物质的分子结构式见图),该反应即双缩脲反应。 铜溶液作用,就会形成紫色或蓝紫色络合物。
注:除-CO-NH-有此反应外,(-CONH2-)、(-CH2-)、(-NH-)、(-CS-CS-NH2)等基团亦有此反应。 由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键,因此也能与铜离子在碱性溶液中发生双缩脲反应,且颜色深浅与蛋白质的含量的关系在一定范围内符合比尔定律,而与蛋白质的氨基酸组成及分子量无关,故可用双缩脲法测定蛋白质的含量(借助分光光度计可减小误差)。 双缩脲反应主要涉及肽键,因此受蛋白质特异性影响较小。且使用试剂价廉易得,操作简便,可测定的范围为1~10mg蛋白质,适于精度要求不太高的蛋白质含量的测定,能测出的蛋白质含量须在约0.5mg以上。双缩脲法的缺点是精确度低、所需样品量大。干扰此测定的物质包括在性质上是氨基酸或肽的缓冲液,如TrIs缓冲液,因为它们产生阳性呈色反应,铜离子也容易被还原,有时出现红色沉淀。 双缩脲试剂由NaOH溶液(0.1g/mL)和CuSO4溶液(0.01g/mL)配制而成,配制比例为5:1。但是双缩脲试剂不用现配现用,先加入NaoH营造碱性环境,再加入CuSO4。这是与斐林试剂不同的地方。