巯基（具有特殊生理功能的基团）
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更新时间：2023-05-22
巯基
具有特殊生理功能的基团
基本信息
| 中文名 | 巯基 |
| 别名 | 氢硫基；硫醇基 |
| 外文名 | sulfhydryl group |
| 化学式 | —SH |
| 性质 | 具有臭味，弱酸性、易被氧化 |
| 拼音 | qiú jī |
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介绍
性质：具有臭味，弱酸性、易被氧化。
巯基与二硫键的相互转化
体内含有巯基的功能蛋白主要是通过巯基与二硫键的相互转化来实现其功能的。在体内和人工条件下 , 二者之间实现着互相转化的过程。在体内自然状态下 , 二硫键与巯基的相互转化主要是通过巯基 /二硫键氧化还原酶的催化而实现的。天然二硫键的形成是许多蛋白正确折叠中的限速步骤 , 在稳定蛋白质构象和保持蛋白质活性方面起重要作用。在体外人工环境下 , 从氨基酸水平来看 , 半胱氨酸在碱性溶液中易被氧化形成二硫键 , 生成胱氨酸。氧化和还原剂均可打开二硫键。在研究蛋白质结构时 , 氧化剂过甲酸可定量拆开二硫键 , 生成相应磺酸。还原剂如巯基乙醇、巯基乙酸也能拆开二硫键 ,生成相应巯基化合物。由于半胱氨酸中巯基很不稳定 ,极易氧化 , 因此利用还原剂拆开二硫键时 , 往往进一步用碘乙酰胺、氯化苄、N-乙基丁烯二亚酰胺和对氯汞苯甲酸等试剂与巯基作用 , 将其保护起来 , 防止其重新氧化。
含巯基的有机物
检测方法
1. RP-HPLC法测定巯基含量
采用色谱柱Kromasil-C18 (250×4.6mm, 5μm)，流动相A(0.1%TFA)和流动相B（甲醇）梯度洗脱：流动相B 40%~80%，0~10min，然后80% B保持5min，流速0.8mL/min，检测波长327nm，得到NTB标准曲线y=3.67059x+0.14123，回收率101.9%，RSD=l.17%，从而建立了一种高灵敏度巯基检测方法。
2. 采用分子荧光光谱法作为反应条件，用反相高效液相色谱梯度洗脱法测定巯基
用OPA、丹酰氯、茚三酮与半胱氨酸反应，测其可见紫外吸收光谱及荧光光谱；在不同PH、温度、反应时间条件下，用OPA与半胱氨酸反应测其荧光度；分别吸收0.1mmol/L半胱氨酸溶液0、20、40、60、80、100 μl，各加入10 μlHO,室温下反应30min，然后加热蒸干，残渣用200μl OPA衍生液，定容至5 ml，4 min时测其荧光光谱。取pH8.4的硼酸缓冲溶液 5μl，混合10次；加入OPA衍生液2μl，混合进样走HPLC。梯度条件：洗脱液B所占比例0min为0，17min线性增加至60%，17.5min线性增加至100%，20min洗脱结束。激发波长为340nm,荧光检测波长为450nm。
3.柱前衍生高效液相色谱-紫外检测法
以tris(2-carboxylethyl) – phosphine (TCEP)为还原剂，7–fluorbenzo–2–oxa –1,3– diazole– 4-sulfonate(SBD-F)为衍生剂，N-乙酰半胱氨酸为内标，C8色谱柱分离，流动相为甲醇 -磷酸盐缓冲液（pH =3. 0）,梯度洗脱 ,385 nm处检测。线性范围为8. 3～1042. 6 μmol/L,最低检测限为 0.42μmol/L,日内精密度为1.67%～1.86%,日间精密度为 2.08%～3.06 %,平均回收率为 98.1%～103.2 %。
4. 电化学脱附与荧光技术联用
5.拉曼光谱法
